A、F2表现型的比为3：1，属于性状分离，A错误；B、F1在减数分裂形成配子时，等位基因随着同源染色体的分开而分离，产生配子的比为1：1，B正确；C、F2基因型的比为1：2：1，是产生的配子随机结合形成的，属于结果而不是实质，C错误；D、测交后代比为1：1，是检测F1基因型的，不能说明基因分离定律的实质，D错误．故选：B．
