如何消除PCR的拖尾

PCR扩增出来有目的条带,但是有拖尾,呈弥散片
2024-12-01 18:27:43
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回答1:

消除PCR拖尾的方法:

1、纯化模板

2、更换Buffer

3、适当提高退火温度

4、适量用酶

5、适当降低dNTP和镁离子的浓度

6、减少循环次数

PCR拖尾产生的原因:

1、模板不纯

2、Buffer不合适

3、退火温度偏低

4、酶量过多

5、dNTP、Mg 2*浓度偏高

6、循环次数过多

扩展资料

一、PCR无扩增物

(一)原因:

1、模板含有抑制物,含量低

2、Buffer对样品不合适

3、引物设计不当或者发生降解

4、反应条件:退火温度太高,延伸时间太短

(二)解决方法:

1、纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量

2、更换Buffer或调整浓度

3、重新设计引物(避免链间二聚体和链内二级结构)或者换一~管新引物

4、降低退火温度、延长延伸时间

参考资料来源:百度百科-PCR技术

回答2:

拖尾在生物专业词汇叫做smear。造成此的原因有多种。一般来讲,有以下几点:
1,引物设计不佳,造成了拖尾现象。
2,PCR中DNA浓度加的太多,造成了拖尾。
3,mg2+浓度加的太高,造成了拖尾。
4,跑胶电压不合适,造成了拖尾。
5,退火温度不合适,造成了拖尾。

这些都可能造成拖尾,请认真分析之。谢谢。

回答3:

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