实时荧光定量pcr内参是什么东西

实时荧光定量pcr内参是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

扩展资料：

PCR原理：

1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

2、PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

参考资料来源：百度百科—实时荧光定量PCR

1、实时荧光定量PCR内参：

在不同的PCR反应管中已定量的内参和引物，内参用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内参也被扩增。

在PCR产物中，由于内参与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内参为对照定量待检测模板。

2、选择：内参一般是固定的，可以用实验室之前就有的。或者用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。

扩展资料

（1）内参在传统定量中的作用：

由于传统定量方法都是终点检测，即PCR到达平台期后进行检测，而PCR经过对数期扩增到达平台期时，检测重现性极差。同一个模板在96孔PCR仪上做96次重复实验，所得结果有很大差异，因此无法直接从终点产物量推算出起始模板量。

加入内参后，可部分消除终产物定量所造成的不准确性。但即使如此，传统的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。

（2）内参对定量PCR的影响：

若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。

但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内参。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内参，但仍然只是一种半定量的方法。

参考资料来源

百度百科-实时荧光定量PCR

内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。

如果内参表达量一致，说明你PCR的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了

内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因。

管家基因，具体可以咨询公司，也可以自己看文献，常用的有GAPDH，beta-actin和18srna，根据不同的来源选用不同的管家基因，比如GAPDH就被人诟病做癌细胞基因时超不准。。。