解；稀释涂布平板法，包括系列稀释和涂布平板两个过程，涂布平板之前需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释．A正确．B、涂布平板时，需要将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面．B正确．C、只有稀释度足够大的菌液才能在培养基表面形成单个的菌落．C错误．D、操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理，以防止杂菌污染．D正确．故应选C．
