鉴定转录因子与启动子结合的方法和原理

鉴定转录因子与启动子结合的方法和原理求详细解释!
2025-03-21 23:02:07
推荐回答(2个)
回答1:

一般有体外和体内两种较为常用的方法:
体外:用EMSA
通常将纯化的蛋白和32P同位素标记的DNA探针(取promoter部分)一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物比非结合的探针移动得慢。然后再放射自显影的仪器上就可以看到条带,如果条带移动得慢,就是有结合。
体内:报告基因方法
就是将你想要检测的promoter装在一个载体上,然后导入特定的细胞内。该细胞内有表达或者过表达你所想检测的转录因子。如果转录因子可以结合在你的promoter上,就可以启动下游的报告基因表达。报告基因可以是荧光蛋白,也可以是荧光素酶。

注:promoter--启动子。其实enhancer也可以用来当promoter。

回答2:

可以在启动子下游连接一个报告基因,如GFP(绿色荧光蛋白基因)。当转录因子与启动子结合时,就会启动其下游的基因转录,GFP表达,可以看到绿色荧光。