组织分离法，也叫无性分离法，是利用子实体的组织块，在适宜的培养基和生长条件下分离、培育纯菌丝的一种简易方法。这种分离法操作容易，后代能保持原菌株的优良性，不易发生变异。通常按以下步骤进行：
（1）种菇消毒将优选的标准种菇置于接种箱内，用75%的酒精对种菇表面进行擦洗消毒，并用无菌纱布吸干，置于消毒过的培育皿内备用。其种菇挑选、用具消毒同前。（2）切块把种菇撕开，在菌盖和菌柄交界处或菌褶处，用灭菌过的接种刀，切取一小块做接种块。然后将其纵切成若干块的小薄片备用。为了减少带杂菌的机会，切取组织块时尽量取小一些，以获得纯度高的菌种，而且小块容易成活。松茸组织分离用接种针挑取菌褶小块更好。（3）接种培养用接种针挑取一小块接种块，小心地接入斜面试管培养基的中央，置于25℃左右的培育室（箱）内培养。接种时注意无菌操作，千万不可大意。经过5～7天的培养，当组织接种块上长出白色的菌丝并向培养基上蔓延生长时，应选择健壮、优良的菌丝体，进行提纯选育，另管培育成一代母种。
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