如何检测抗凝血效果

给出几种实验方法吧要原理步骤清楚

2025-03-03 16:24:35

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回答1：

【摘要】目的比较病人用EDTA抗凝血和枸橼酸钠抗凝血检测PT、INR结果的差异。方法 120位受试对象用枸橼酸钠和EDTA抗凝各采两管血，分离血浆后在STAGO仪器上检测PT，对两种抗凝方式所得PT、INR结果进行线性回归分析，分析其相关性及其结果间有无显著性差异。结果以枸橼酸钠法测得PT为y，EDTA法测得PT为x，两者间PT线性方程为y=0.86x-2.8，R2=0.97，PT结果相关性好，但差异有显著性。INR线性方程为y=0.95x+0.03，R2=0.98，相关性好且差异无显著性。讨论 EDTA抗凝血浆检测PT在临床上是可接受的，但前提条件是应建立自己的参考区间，报告INR结果时还应统计EDTA抗凝血的MNPT（正常人平均PT），根据公式INR=（PT/MNPT）ISI计算INR值。

【关键词】 EDTA; 凝血酶原时间

现阶段进行凝血项目检测都是用枸橼酸钠抗凝，抽取血液量与枸橼酸钠的比例是9：1，在真空采血管中包含固定量的0.3 ml抗凝剂，真空采血管内的负压保证了从血管中吸出2.7 ml血液。但是在实际情况中偶尔会发生血液量不足的问题，比例发生改变会影响凝血结果[1]。使用EDTA抗凝管可能会解决这个问题，因为EDTA粉末在抗凝过程中几乎不对血液造成稀释，也就不会发生稀释比例的改变。本文研究在于诠释用EDTA抗凝时所测得的PT、INR结果与枸橼酸钠抗凝时的相关性。

1 材料和方法

1.1 仪器和试剂 Stago 公司生产的STA型全自动凝血分析仪，使用Stago 公司配套试剂，配套质控品。Dade-Behring公司生产的INR校准血浆；

1.2 标本来源收集本院健康体检者标本60例，男30例，女30例，年龄20～53岁；收集本院心胸外科心脏瓣膜置换术后及其它原因致PT延长病人标本60例，男35例，女25例，年龄21～55岁。

1.3 实验方法

1.3.1 枸橼酸钠抗凝血MNPT的计算同一仪器使用不同生产厂家、不同批号的凝血活酶试剂所计算出的正常人平均PT（MNPT）值是不一样的，故我们应重测所用凝血活酶试剂匹配的仪器MNPT值，而不应使用生产厂家给我们提供的MNPT值[2]。计算MNPT需要至少20份正常血浆。本实验我们挑选60名健康体检者，经过仪器测试PT值，剔除>2S的数据, 经统计学处理，计算得出枸橼酸钠抗凝血的MNPT值。

1.3.2 EDTA抗凝血MNPT的计算 60名健康体检者的EDTA抗凝血，测试PT结果后，剔除>2S的数据, 经统计学处理，计算得出EDTA抗凝血的MNPT值。

1.3.3 Local ISI(仪器区域国际敏感指数)的建立仪器不可使用试剂说明书上附带的ISI值，因为此ISI值是试剂制造商用手工方法所测出的，并非是实验室仪器对所用批号凝血活酶试剂的Local ISI[3]，所以要重新建立Local ISI。用已标注INR值的校准血浆复溶后，在Stago仪器上测PT 2～3次，得出PT秒数均值，INR=（PT/MNPT）Local ISI，将枸橼酸钠及EDTA抗凝血各自的MNPT结果及已知的INR结果代入上式，即可求出Local ISI=lgINR/(lgPT－lgMNPT)，故能分别求出两种抗凝方式各自的Local ISI。

1.3.4 PT、INR的检测本院健康体检者标本60例，本院心胸外科心脏瓣膜置换术后及其它原因致PT延长病人标本60例用枸橼酸钠和EDTA抗凝管各抽一管血，3 500 r/min离心5 min,以制备乏血小板血浆，在4 h内完成检测。根据公式INR=（PT/MNPT）Local ISI，得到INR值。

1.4 统计学方法对枸橼酸钠和EDTA抗凝所得的各120份标本的PT、INR结果进行线性回归统计，分析其相关性，并用配对t检验分析两者间是否存在显著性差异。

2 结果

2.1 MNPT结果橼酸钠抗凝血MNPT为13.8 s，EDTA抗凝血MNPT为18.6 s。

2.2 Local ISI结果橼酸钠抗凝血Local ISI为1.24，EDTA抗凝血Local ISI为1.33。

2.3 枸橼酸钠抗凝血的PT结果为y，EDTA抗凝血的PT结果为x，结果见表1。经线性回归统计，两者间PT线性方程为y=0.86x-2.8，R2=0.97, PT结果相关性好，经配对t检验，t=-29.8,P=0.0<0.05, 差异有显著性。

2.4 枸橼酸钠抗凝血的INR结果为y，EDTA抗凝血的INR结果为x，结果见表1。经线性回归统计，两者间INR线性方程为y=0.95x+0.03，R2=0.98, INR结果相关性好，经配对t检验，t=0.699，P=0.492>0.05，差异无显著性。表1 枸橼酸钠与EDTA抗凝血的PT、INR检测结果

3 讨论

3.1 研究发现PT、INR结果间是有相关性的，在临床上使用EDTA抗凝管检测PT是可行的。但同时也发现，PT结果间差异有显著性，两种抗凝方式下PT的生物参考区间是不同的，所以要建立EDTA抗凝下PT的参考区间。INR结果间差异无显著性，因为我们重新计算了EDTA抗凝下的MNPT，从上述结果可见，EDTA抗凝下的MNPT比枸橼酸钠抗凝下MNPT要长，通过PT/MNPT在一定程度上消减了EDTA抗凝下PT的延长，INR结果有良好的相关性。因此我们可以报告INR结果或者通过公式换算PT结果y=0.86x-2.8。

3.2 PT结果间的差异主要是因为标本的稀释不同造成的，因为枸橼酸钠抗凝管中存在0.3 ml抗凝剂，血液：抗凝剂=9：1，而EDTA管中抗凝剂是固体粉末，加入血液后几乎不对血液稀释，因而抽取血液量的多少十分关键，这也是分析前质量控制的一个环节。

3.3 使用EDTA抗凝血的优势在于抗凝管可与血液学分析使用同一管血液，血样进行完血液学分析后可分离血浆，用于凝血项目检测，便于检验科仪器自动化的建立。使用一管血液不仅节省抗凝管，而且病人没有必要抽取更多管血液，也便于医疗废弃物的处理，不会因为血量的多少造成稀释不同而影响结果。

3.4 本文使用经过计算的EDTA抗凝下的Local ISI，与枸橼酸钠抗凝下的Local ISI是不一样的，因为现阶段没有EDTA抗凝下的INR定值血浆存在，以后若有INR定值血浆来校准ISI会使得EDTA抗凝的使用更方便，更有市场。

【参考文献】
[1] 徐爱丽,毛庆民,张乐研.标本采集量对PT、APTT检测结果的影响[J].临床军医杂志,2007,35(6):913.

[2] 倪赞明，徐明光，王晓明，等.凝血酶原时间ISI/INR系统测定中的一些问题及改进意见[J]检验医学,2006,21(5):492�495.

[3] 许蕾,王学锋,李泳，等.血浆凝血酶原时间测定中建立仪器区域国际敏感指数的实验控讨[J]检验医学,2004,19(5):441�443.

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