不同的限制酶切割后产生的末端一般不同，而DNA分子要连接时，必须要求两个末端是相同的情况下才能连接。因此，不同的限制酶切割基因可以避免自连。
用不同的酶切，目的是为了保证拼接的方向性。而且最起码减少了自身接成环，所以可以有效的减少自身拼接几个相互拼接的概率比较小没有人说这样可以完全杜绝你说的那个情况
