谁能讲讲植物组织培养的具体步骤

植物组织培养步骤
一、培养材料的采集
组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、睫、叶、花、芽和种子的子叶，有时也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般很少采用。
对于木本花卉来说，阔叶树可在一、二年生的枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚轴，草本植物多采集睫尖。
在快速繁殖中，最常用的培养材料是睫尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取睫尖的分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。这里使用马铃薯

二、培养材料的消毒
（一）先将材料用流水冲洗干净，最後一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。
（二）在无菌坏境中将材料放入70％洒精中浸泡30－60秒。
（三）再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01％升汞水中消毒10分钟。
（四）取出後用无菌水冲洗三、四次。
三、制备外植体
将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。然後切成0.2－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。在操作中严禁用手触动材料。
四、接种和培养
（一）接种　
　　在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种4－10个。
（二）封口　
　　接种後，瓶、管用无菌药棉或宾吨f，培养皿用无菌胶带封口。
（三）温度　
　　培养基大多应保持在25℃左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。
（四）增殖　
外植体的增殖是组培的关键阶段，在新梢等形成後为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1个月左右後，可视情况进行再增殖。
（五）根的诱导　
继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月後即可获得键壮根系。
五、组培苗的练苗移栽
试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境，必须进行炼苗。一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然後取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98％左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。

植物组织培养材料和方法
植物组织培养材料和方法

从低等的藻类到苔藓、蕨类、种子植物等高等植物的各类、各部分都可采用作为组织培养的材料，一般裸子植物多采用幼苗、芽、韧皮部细胞，被子植物采用胚、胚乳、子叶、幼苗、茎尖、根、茎、叶、花药、花粉、子房和胚珠等各个部分。

　　由于植物在自然条件下，表面常被霉菌和细菌污染，故材料必须进行灭菌处理。一般用漂白粉溶液（1～10％）、次氯酸钠溶液（0．5～10％）、升汞溶液（0．01％）、乙醇（70％）或过氧化氢（3～10％）等处理后，再用无菌水反复冲洗至净，然后在无菌室内，将所取的组织迅速培养在固体培养基上。在适宜的条件下，受伤组织切口表面不久即能长出一种脱分化的组织堆块，称为愈伤组织（Callus），此种愈伤组织在适当的培养基上经一定时间即能诱导生长成整株植物，因此愈伤组织既可是某种植物代谢产物的来源，又是诱导成株的主要途径之一。

　　在适宜的培养条件下，还可使愈伤组织长期传代生存下去，这种培养称为继代培养。但在继代培养中，不少植物培养的组织或细胞随着再培养代数的增加，分化能力就逐渐降低甚至丧失，其原因可能是由于在培养过程中原有母体中存在的、与器官形成有关的特殊物质被逐渐消耗所致，因此可以用激素或改善营养条件使之恢复，也有认为是组织和细胞在长期培养中遗传往的改变，主要是染色体的变化，出现大量多倍性或非整倍性细胞，这种改变恢复的可能住较小。不同的培养基可以使愈伤组织具有不同的生长速度，结构也可松可紧，利用这些特性可使之分散成为单细胞或很小的细胞团。要形成单细胞培养宜在较高盐分、高生长素及高水解酪蛋白的培养基中进行，然后移入液体并经搅拌而分散成单细胞。也有用加入一些果胶酶的办法，但一般来说要得到纯一的单细胞是很少的。

　　在培养药用植物选材时，还应考虑到所需要的次生物质在植物体中的合成部位，如果选材和培养方法适当，可使原植物内所产主的代谢物通过细胞或组织培养发生生化转变而获得。

　　通过组织培养可获得有效成分，但实际上只有大量培养成功才有经济价值。因此在生产上常采用悬浮培养法来代替含有琼脂的固体培养基。愈伤组织悬浮培养的生长通常比静止培养快，这是由于悬浮培养时营养成分可较快地渗入细胞，抑制生长的代谢废物可较快地除去，同时供氧情况也较好，在进行这种培养时要注意通气与定期更新营养液，这是保证生长稳定，次生物质产量高的关键之一。

马铃薯培养基　　马铃薯 20g
　　蔗糖 2g
　　自来水 100mL
　　琼脂 2g
　　pH 自然（约6.0）
　　灭菌 1.05kg/cm2，20min
　　马铃薯处理方法:
　　马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min（注意火力的控制，可适当补水） ，用纱布过滤，滤液加糖，补足水至100ml，装入三角瓶。

哪个部分都可以，根块茎部大概比较方便
选用液态培养基
要经常更换培养基
注意消毒，杀菌

把它切成块，用土埋。明年就长出来了