PCR的两步法和三步法有什么区别

1、步骤不同：两步法退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，而三步法则分两次完成。

2、用时不同：两步法减少一次升降温过程，提高了反应速度，用时较短。而三步法则比两步法用时更长。

3、适用条件不同：两步法中，PCR扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成。三步法的PCR扩增区则较长，需要降低系统温度，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

扩展资料

三步法的标准步骤与检测：

1、DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA

2、退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

3、延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。

4、检测：PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。

参考资料来源：百度百科-PCR

两步法是只有循环中只有“变性”—“退火延展”两个温度变化
三步法是“变性”—“退火”—“延展”三个温度变化
简单说两步法就是2个温度循环
三步法就是3个温度循环
用两步法快些，但要看酶活性，
三步法比较保险。
这是我十年前上学的时候老师教的，回答完毕！

很多情况我们都常用三步法，保证在72度延伸，但是如果条件很苛刻，我们用两步法能够得到三步法批不到的片段。您说的如果是定量PCR的话，多情况用二步法，因为可以再60度左右既可以退火又可以延伸，因此很多定量PCR仪推荐用两步法。但是如果你想得到更加严谨的数据，三步法用于定量PCR是更准确的。