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拌土:蛭石:黑土:珍珠岩=3:1:0.5
用拟南芥PNS营养液浇,然后再将拟南芥种子点到土上。再用保鲜膜封住,再用报纸盖上数日后取走报纸,每天光照16小时。
拟南芥PNS营养液
1M 磷酸缓冲液(PH5.5) 2.5ml
1M KNO3 5ml
1M MgSO4·7H2O 2ml
1M Ca(NO3)2·4 H2O 2ml
20mM Fe·EDTA 2.5ml
MS微量元素 1ml
加水定容至1L
拟南芥生长发育条件的控制
拟南芥一般是冬性一年生植物,自然条件下种子在秋 天发芽,幼年期度 过冬天,花分生组织在春季分化,种子在夏季成熟脱落。大多数实验室栽植的拟南芥品种在发芽后 4周开花,而在 4~6周后采集种子。不同拟南芥生态型其发育进程快慢、开花时间早晚、何时成熟等除了取决于遗传性以外,也受外界环境条件的影响。
1.光
光对拟南芥生长的影响涉及光强和光周期两个方面。以光强度说,在生长室中一般最适光的光强度为120~150μmol/(㎡ · s)(1μmol/(㎡· s)=5烛光 =0.217W/m 2 =53.8lx),这可通过荧光灯,配以白炽光来达到。在 夏天温室中,60%荫影有助于光强控制和温度调节,高光强或直接太阳光照射对较老植株可以忍受,而年幼植株避免强光。
拟南芥在连续照光和 长日下开花加快,短日时开花被 阻遏或延迟,这表 明拟南芥开花需要长日照光周期,一般至少12h的光照。在冬季温室中可补充早晚的光照,以满足光周期需要,一般给以16h光照,8h暗期为宜。连续光照可促进生殖循环,略微提早开花,但使叶数减少及降低种生成,而较短日照有利于营养生长。
2.温度
温室和生长室的温度应予以控制,最适生长温度 为25℃ 左右,稍低的温度也是允许的。当水分供应充足时,植物甚至能在高达34℃ 时生长,但会减少受精。较老的植物能忍受高温,但保持25℃对整个生长周期是有利的。当种子形成时,生长室温度宜设 定在25℃,而温室温度宜在23℃,夜温可比日温低2~4℃为宜。[2]
对于许多迟开花的拟南芥生态型来说,幼苗期要给以 4℃左 右处 理一 个时期(如几周),以完成春化作用,从而在长日下促进开花。而对于常用的拟南芥生态型 Landsbergerecta和 Columbia则 不需作春化处理就能 开花。 必须注意这里的低温春化处理是不同于播种时破除休眠的低温处理,破除休眠的低温处理又称层积处理(stratification)。
3.水分
在种子发芽后的头几周里,理想的供水是来自毛细管由下至上的渗水,只有当土壤呈现干旱时适时灌溉。过量供水会引起土表藻类和真菌的生长。在拟南芥头两片真叶开始伸展之前必须避免干旱,当真叶长出后,灌水频率可相应减少,如每周一或两次,而至长角果充实阶段必须保证水分供应,以利于种子形成。浇水时最好待90%左右的穴盘或花盆完全干燥之后进行。[2] 不仅土壤供水状况影响到拟南芥的生长发育,而且湿度也会影响水分供给。虽然湿度的增加(如 50% ~60%)会大大减少土表干旱的影响以及发芽着的幼苗脱水危害,但一般说来拟南芥植株,包括幼苗都能忍受低湿度,处在莲座状阶段的植株可在不同湿度下生长,当长角果进入成熟阶段时,较低湿度(如 <50%)是有利的。
4.营养
正常情况下只要配置合适的土壤混合物,就并非必须供给营养物质,但是贫瘠的营养状况会降低植株高度,使它提早开花,并使种子着生减少。在生长发育的后期阶段补充营养物质将会增 加种子着生,并产生较健壮的植 株。当植株呈现出轻微淡绿色时,表明营养供给不 足,则应立即施以营养物质,正常健壮的拟南芥植株是亮暗绿色的。