基因表达技术和基因沉默技术作为基因功能研究中最常用的手段,已经成为生物学、医学和药物研发中的主流技术。分体外(化学siRNA)、体内(质粒转染、病毒包装)实验路径。其中,以病毒载体为媒介的基因表达和基因沉默技术(可以方便地为您提供包括基因调取、载体设计纳闭高、载体构建、病毒包装、细胞转基因等在内的整体实验技术服务,实现基因插入、基因敲除、基因上调、基因下调、可控及组织特异性表达等目的。)已经发展成为当今炙手可热的基因功能研究手段。
1. 体外化学合成siRNA: 对于瞬时基因沉默试验,容易获得高水平的瞬时沉默效果,特异性强,对细胞或者组织的毒副作用小、可大规模制备、操作简便等优点,特别适用于基因靶位点不确定情况下,进行siRNA有效片段的筛选。干扰效率是否明显与靶点的选择、实验条件的优化、实验操作等紧密相关。
2. 体内表达-质粒转染:通过构建真核表达质粒,荧光蛋白协同表达示踪目的基因的表达情况,及基因敲减效果的相关态侍检测。转染效率取决于细胞类型及转染条件和实验方法。局限是很多细胞用质粒转染效率不高,以致有的都没法检测沉默效果。
3. 体内表达-病毒转染:在转染效率大于80%的情况下,干扰效率可达70%。腺病毒或慢病毒RNAi可在转染细胞,如神经细胞、悬浮细胞、干细胞等难转染的细胞中进行目的基因的沉默。慢病毒RNAi后续可转染靶细胞,筛选混合稳定细胞株(通过抗生素筛选,实现目的基因在靶细胞的基因组中的稳定整合)就是实验周期相对长了点,从设计靶点到最后病毒包装后的滴度测定,洞尺后续检测要100多个工作日。实验操作上也相对技术含量高了。
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